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聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒
  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠(chǎng)商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商
  • 更新時(shí)間:2017-09-20
  • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:1986
簡(jiǎn)要描述:

南京信帆生物技術(shù)有限公司專(zhuān)業(yè)銷(xiāo)售聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒系統(tǒng)系統(tǒng)系統(tǒng),現(xiàn)貨供應(yīng),發(fā)貨及時(shí),歡迎。

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產(chǎn)品詳情

本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn),不得用于醫(yī)療或食用

產(chǎn)品名稱(chēng):聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:5T
產(chǎn)品貨號(hào):D1250-5
單位:
供應(yīng)商:南京信帆生物
        
聚丙烯酰胺凝膠DNA回收試劑盒
1. 勻漿和細(xì)胞裂解。
使用不同的實(shí)驗(yàn)材料需采用不同的勻漿步驟,具體說(shuō)明如下:
【從動(dòng)物組織中提取基因組DNA】
◆使用研缽進(jìn)行勻漿時(shí):
① 取1~100 mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的研缽中,快速用力展研成勻漿。
注)下列組織請(qǐng)加液氮研磨至粉末狀。
A.富含DNA酶的胰臟、脾臟、胸腺、淋巴等組織。
B.富含膠原蛋白的皮膚、肌腱等組織。
C.富含角質(zhì)蛋白的組織或堅(jiān)硬的組織(如骨骼)等。
② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1,溫和研磨30秒鐘。
注)使用上述①-注)的實(shí)驗(yàn)材料時(shí),請(qǐng)?jiān)诩尤隨olution A及RNase A1后,將研缽置于65℃水浴上研磨1分鐘。
③ 收集650 μl研磨好的組織勻漿液移至Collection Tube中。如果勻漿體積不足650 μl,請(qǐng)補(bǔ)充Solution A至650 μl,65℃保溫5分鐘。
◆使用研磨棒進(jìn)行勻漿時(shí):
① 取1~100 mg的動(dòng)物組織或人組織移入冰浴預(yù)冷的Collection Tube 中,用研磨棒快速研磨成糊狀。
② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成勻漿。
③ 加入350 μl的Solution A將研磨棒上的勻漿沖入Collection Tube中,充分振蕩混合后,65℃保溫5分鐘。
【從植物材料或植物培養(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA】
① 按下表稱(chēng)取適量的新鮮植物材料(如選用的是冷凍干燥植物材料,則用量減半),剪成小塊放入研缽中,加入液氮,待樣品冷凍*后快速、用力研磨至粉末狀。研磨時(shí)應(yīng)間斷加入液氮以防止材料融化。
植物材料種類(lèi)
植物材料使用量*
植物花、葉片
10~100 mg
植物莖
60~240 mg
植物根
80~240 mg
植物種子
80~240 mg
* 如選取植物的根、種子等樣品時(shí),因其基因組DNA含量很低,需使用超過(guò)表格中所示的參數(shù)用量,此時(shí)請(qǐng)分兩管進(jìn)行步驟1~6的實(shí)驗(yàn)操作,在步驟7的操作中再將各管溶液分次加入至同一Spin Column中過(guò)濾,使各管的基因組DNA結(jié)合到同一個(gè)Spin Column上。
如從培養(yǎng)的植物細(xì)胞中提取基因組DNA,請(qǐng)離心收集2×103~1×107的培養(yǎng)植物細(xì)胞,加入150 μl水充分懸浮細(xì)胞后移入研缽中,加入液氮后快速、用力研磨至粉末狀。
注)樣品研磨應(yīng)充分,否則將會(huì)嚴(yán)重影響基因組DNA的收率。
② 將研缽移至65℃水浴,當(dāng)樣品粉末剛開(kāi)始融化時(shí),向研缽中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1,用力碾磨30秒。
③ 收集650 μl研磨好的組織勻漿移至Collection Tube中。如勻漿體積不足650 μl,請(qǐng)補(bǔ)充Solution A至650 μl。65℃保溫15分鐘。
注)處理富含纖維的根/莖等植物材料或富含淀粉、蛋白質(zhì)的種子等時(shí),可延長(zhǎng)水浴時(shí)間至60分鐘。
【從全血中提取基因組DNA】
① 取10~250 μl的全血(含抗凝劑)加入至Collection Tube中。
② 加入500 μl的Solution A。
③ 加入1 μl的RNase A1,激烈振蕩15秒鐘后,冰浴5分鐘。
注) 人與動(dòng)物的抗凝全血的一次處理量為≤250 μl;禽類(lèi)、兩棲類(lèi)的抗凝全血的一次處理量為≤10 μl。
【從培養(yǎng)細(xì)胞中提取基因組DNA】
◆使用懸浮培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞時(shí):
① 使用Collection Tube收集1×105~1.5×107的細(xì)胞懸浮液,5,000 rpm離心5分鐘,棄上清(細(xì)胞培養(yǎng)液)。
② 加入150 μl的滅菌蒸餾水或PBS懸浮細(xì)胞。
③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1,激烈振蕩15秒鐘,然后室溫靜置1分鐘。
◆使用貼壁細(xì)胞時(shí):
① 棄盡培養(yǎng)液,向培養(yǎng)皿中加入650 μl的Solution A,室溫靜置1分鐘。
注)96孔板等的每個(gè)孔中一次容納不了650 μl 溶液時(shí),請(qǐng)分?jǐn)?shù)次處理細(xì)胞。
② 用移液槍的槍頭吹落貼壁培養(yǎng)細(xì)胞,取650 μl的細(xì)胞懸浮液轉(zhuǎn)移至Collection Tube中。
③ 加入0.8 μl的RNase A1,激烈振蕩15秒鐘,然后室溫靜置1分鐘。
2. 加入400 μl的Solution B,振蕩混合。
3. 加入1 ml的4℃預(yù)冷的Solution C,充分混勻后,12,000 rpm離心2分鐘。
4. 棄去上層有機(jī)相,再加入1 ml的4℃預(yù)冷的Solution C,充分混勻后,12,000 rpm離心2分鐘。
5. 棄去上層有機(jī)相,然后將水相溶液(無(wú)色下層)轉(zhuǎn)移至置于Collection Tube上的Filter Cup中,12,000 rpm離心1分鐘。
注)有機(jī)相(上層)帶有顏色,請(qǐng)務(wù)必除盡,否則會(huì)阻礙DNA結(jié)合到DNA制備膜上。相間沉淀不必考慮,在過(guò)濾時(shí)將被去除。
6. 棄Filter Cup,在濾液中加入400 μl的DB Buffer,混合均勻。
7. 將試劑盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。將上述操作6混合溶液轉(zhuǎn)移至Spin Column中,12,000 rpm離心1分鐘,棄濾液。
8. 將500 μl的Rinse A加入至Spin Column中,12,000 rpm離心30秒鐘,棄濾液。
9. 將700 μl的Rinse B加入至Spin Column中,12,000 rpm離心30秒鐘,棄濾液。
注)請(qǐng)沿Spin Column管壁四周加入Rinse B,這樣有助于*沖洗沾附于管壁上的鹽份。
10. 重復(fù)操作步驟9。
11. 將Spin Column安置于新的1.5 ml的離心管上,在Spin Column膜的中央處加入50~200 μl的滅菌蒸餾水或Elution Buffer,室溫靜置1分鐘。
注)把滅菌蒸餾水或Elution Buffer加熱至65℃使用時(shí)有利于提高洗脫效率。
12. 12, 000 rpm離心1分鐘洗脫DNA。
如果實(shí)驗(yàn)室備有適合于Spin Column接口的負(fù)壓裝置,可從上述操作步驟6完成以后進(jìn)行以下操作。
7. 將試劑盒中的Spin Column插到負(fù)壓裝置的插口上,將上述操作步驟6的混合溶液轉(zhuǎn)移到Spin Column中,開(kāi)啟調(diào)節(jié)負(fù)壓裝置,緩慢吸走Spin Column中的溶液(流速控制在1滴/秒)。
8. 將負(fù)壓調(diào)至zui大,向Spin Column中加入500 μl的Rinse A,吸盡Spin Column中溶液。
9. 向Spin Column中加入700 μl的Rinse B,吸盡Spin Column中溶液。
注)請(qǐng)沿Spin Column管壁四周加入Rinse B,這樣有助于*沖洗沾附于管壁上的鹽份。
10. 重復(fù)操作步驟9。然后從負(fù)壓裝置上取下Spin Column,將其安置于試劑盒中的Collection Tube上,12, 000 rpm離心1分鐘。
11. 將Spin Column安置于新的1.5 ml的離心管上,在Spin Column膜的中央處加入50~200 μl的滅菌蒸餾水或Elution Buffer,室溫靜置1分鐘。
注)把滅菌蒸餾水或Elution Buffer加熱至65℃使用時(shí)有利于提高洗脫效率。
12. 12, 000 rpm離心1分鐘洗脫DNA。
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