免疫電泳磷酸鹽緩沖液 (pH8.6) 的正確使用方法

該緩沖液在免疫電泳實(shí)驗(yàn)中主要有兩個(gè)用途，使用方法有所不同：

用途一：作為電泳槽緩沖液

稀釋使用：藥典明確指出，用于電泳槽的緩沖液應(yīng)是上述配制液的 10 倍稀釋液。

配制方法：取 1 份上述濃縮的緩沖液母液，加入 9 份純化水，稀釋 10 倍，混勻。

例如：取 100 ml 母液，加入 900 ml 水，得到 1000 ml 的工作液。

注入電泳槽：將稀釋好的工作液倒入電泳槽的正、負(fù)兩極槽中，液面高度需符合電泳儀的要求（通常需浸過(guò)電極）。

注意事項(xiàng)：

一致性原則：電泳槽左右兩槽中的緩沖液液面應(yīng)保持在同一水平，否則會(huì)產(chǎn)生虹吸現(xiàn)象，導(dǎo)致區(qū)帶歪斜。

重復(fù)使用：為節(jié)省試劑，同一批緩沖液可多次使用（通常 3-5 次）。但若發(fā)現(xiàn)緩沖液 pH 值變化過(guò)大、離子強(qiáng)度改變（如因蒸發(fā)導(dǎo)致液面下降）或明顯污染，應(yīng)立即更換新液。

用途二：作為瓊脂糖凝膠的制備緩沖液

直接使用：配制瓊脂糖凝膠時(shí)，應(yīng)使用未經(jīng)稀釋的上述緩沖液母液。

例如：配制 1% 的凝膠，稱取 1 g 瓊脂糖，加入 100 ml 緩沖液母液中。

加熱溶解：在微波爐或水浴中加熱，使瓊脂糖完全溶解澄清，注意不要沸騰過(guò)度以免水分蒸發(fā)。

澆板：待凝膠冷卻至約 50-60°C（不燙手但尚未凝固時(shí)），將其澆注在水平放置的玻璃板或膠片上，插入合適的樣品梳，室溫下靜置凝固。

核心注意事項(xiàng)與常見(jiàn)問(wèn)題

pH 值的精確性：pH 8.6 是此方法的核心參數(shù)。pH 偏差會(huì)直接影響蛋白質(zhì)的帶電性質(zhì)和遷移速率，導(dǎo)致電泳條帶扭曲、擴(kuò)散或結(jié)果不可重復(fù)。每次使用前，尤其是重復(fù)使用的槽液，建議重新檢查 pH 值。

離子強(qiáng)度：緩沖液的離子強(qiáng)度由配方中的鹽濃度決定。離子強(qiáng)度過(guò)高會(huì)產(chǎn)生大量熱，可能導(dǎo)致蛋白變性；過(guò)低則會(huì)導(dǎo)致電泳區(qū)帶擴(kuò)散、條帶變寬。請(qǐng)嚴(yán)格按照配方配制，不要隨意更改鹽的用量。

“搭橋"：在將凝膠板放入電泳槽時(shí)，需要用濾紙或紗布等“橋接"材料連接凝膠和槽中的緩沖液。橋接物需完全浸透，并與凝膠接觸緊密，否則會(huì)導(dǎo)致電流不均。

緩沖液體系一致：為確保電場(chǎng)環(huán)境一致，凝膠中和電泳槽中必須使用相同離子成分和強(qiáng)度的緩沖液。這就是為什么槽液是凝膠緩沖液的 10 倍稀釋液的原因。絕對(duì)禁止在凝膠中使用一種緩沖體系，而在電泳槽中使用另一種。

安全操作：操作電泳儀時(shí)，務(wù)必注意用電安全。在連接或取放凝膠時(shí)，確保電源是關(guān)閉狀態(tài)。

總結(jié)

正確使用免疫電泳磷酸鹽緩沖液 (pH 8.6) 的關(guān)鍵可歸納為：

精準(zhǔn)配制：嚴(yán)格按藥典配方稱量，最后務(wù)必用 pH 計(jì)校準(zhǔn)至 pH 8.6。

區(qū)分用途：

制膠用 -> 使用濃縮母液（未稀釋?zhuān)?/span>

電泳槽用 -> 使用10倍稀釋的工作液。

保持一致性：確保凝膠與電泳槽緩沖液體系一致。

勤于驗(yàn)證：每次實(shí)驗(yàn)前，檢查緩沖液 pH 和狀態(tài)，及時(shí)更換不合格的緩沖液。

遵循以上步驟，即可滿足2025版中國(guó)藥典對(duì)免疫電泳實(shí)驗(yàn)的基本要求，為獲得清晰、可靠的結(jié)果奠定基礎(chǔ)。

 免疫電泳磷酸鹽緩沖液 (pH8.6) 的正確使用方法