非血紅素鐵檢測試劑盒(紅菲咯啉微板法)的計算

產(chǎn)品簡介：

鐵是人體必需的微量元素之一，也是人體中含量最多的微量元素。鐵離子通常以三價鐵形式與轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合，通過轉(zhuǎn)鐵蛋白通道進入細胞，被金屬還原酶 STEAP3 還原成二價鐵后，參與后續(xù)多種生理和生化過程。機體內(nèi)鐵元素的缺乏會引發(fā)各種缺鐵性疾病，如貧血、免疫力低下等，此外還會導(dǎo)致消化不良、記憶力低下等消化系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)疾病。然而，盡管鐵元素對于機體如此重要，卻也不是越多越好的。

進入細胞的鐵被還原成亞鐵離子后，會優(yōu)先形成各種鐵結(jié)合復(fù)合物，參與到各項生理和生化反應(yīng)中去。當(dāng)這些復(fù)合物含量接近飽和時，多余的二價鐵會在細胞中積累，形成不穩(wěn)定鐵池。鐵池中游離的二價鐵參與芬頓反應(yīng)，生成以羥基自由基為代表的活性氧（ROS）物質(zhì)，積累的 ROS 將膜脂過氧化，從而造成細胞功能喪失和細胞死亡。這是細胞鐵死亡的經(jīng)典調(diào)控途徑之一。

動物組織或細胞提取物中非血紅素鐵含量的多少，反應(yīng)出細胞或組織貯存鐵含量的變化。非血紅素鐵含量的測定可避免總鐵含量測定中樣品內(nèi)血紅素鐵的影響。

非血紅素鐵檢測試劑盒與總鐵測定方法相似，但樣品須經(jīng)酸和熱處理，經(jīng)離心后非血紅素鐵釋放到上清液中，而含血紅素鐵的蛋白則留在沉淀中。其測定原理是動物組織或細胞經(jīng)組織消化液在酸性加熱條件處理后，經(jīng)離心可分離出血紅素鐵和非血紅素鐵，非血紅素鐵再被還原劑還原為二價鐵后與紅菲咯啉生成紅色化合物，在500~550nm 有強吸收，可通過酶標(biāo)儀或分光光度計測定。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、1.5ml 離心管稱重。稱取 100mg 左右的組織，放入已稱重的離心管中，再次稱重。兩

次相減得到組織凈重。

2、制備樣品消化液：向離心管中加入組織消化液 1ml，65℃消化不少于 50h，中間用震蕩

器震蕩 3~5 次，每次不少于 10min，確保組織完全消化。用組織消化液定容至 1.5ml，

10000rpm 離心 5min，將管壁及蓋子上的液體甩下，將上清液轉(zhuǎn)移至新離心管，并定容

至 1.5ml，混合備用。

3、配制鐵顯色工作液：將菲啰啉溶液（試劑 C1）、TGA 溶液（試劑 C2）、乙酸鈉溶液（試

劑 C3）按照 3:3:5 配比得到鐵顯色工作液，需現(xiàn)配現(xiàn)用。

4、配制系列鐵標(biāo)準(zhǔn)液：將鐵標(biāo)準(zhǔn)儲液(100μg/ml)用蒸餾水稀釋至 20μg/ml，再按下表進

行操作，依次稀釋。

計算：

以系列鐵標(biāo)準(zhǔn)(1~5 號)(2、5、10、15、20μg/ml)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐

標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程，以測定孔的吸光度代入回歸方程求得樣品消化液中的鐵

濃度，亦可不做標(biāo)準(zhǔn)梯度，直接進行單標(biāo)準(zhǔn)比色測定，一般選擇 5 或者 10μg/ml 的鐵標(biāo)準(zhǔn)。

組織鐵含量(μg/g)=C 測定×V/w

= A 測定/A 標(biāo)準(zhǔn)×V/w×C 標(biāo)準(zhǔn)

式中：

C 測定=經(jīng)標(biāo)曲計算得出的樣品消化液中的鐵濃度(μg/ml)；

V=樣品消化液的總體積=1.5(ml)；

w=組織重量( g)；

C 標(biāo)準(zhǔn)=鐵標(biāo)準(zhǔn)濃度=5 或 10(μg/ml)。

注意事項：

1、操作中的手術(shù)器械、槍頭、容器、96 孔板等，一定保證干燥且干凈，避免鐵污染。

2、組織非血紅素鐵差異較小，一定每個組織和管子都稱重，國產(chǎn)管子的重量相差很多。

3、試劑盒是否過期驗證：取 10ul 鐵標(biāo)準(zhǔn)儲液(100μg/ml)加入 200ul 鐵顯色工作液，看是否顯色為深紅色，如是，則試劑沒過期，可繼續(xù)使用。

4、試劑有效性判讀：用空白管 1 作對照調(diào)零，如空白管 2 讀數(shù)＜0.004 說明沒有污染可以使用，如果空白管 2 讀數(shù)＞0.004，說明組織消化液有污染。

5、組織消化液有強酸性和腐蝕性，請小心操作。

6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：6 個月有效，4℃運輸和保存。

非血紅素鐵檢測試劑盒(紅菲咯啉微板法)的計算